熒光素
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熒光素是具有光致熒光特性的染料，熒光染料種類很多
目錄 |
種類
目前常用于標記抗體的熒光素有以下幾種。
異硫氰酸熒光素
(fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC純品為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。有兩種異構體，其中異構體Ⅰ型在效率、穩定性與蛋白質結合力等方面都更優良。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長為490～495nm，最大發射光波長為520～530nm，呈現明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應用最廣泛的熒光素。其主要優點是人眼對黃綠色較為敏感，通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。
四乙基羅丹明
(rhodamine, RB200) RB200為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性質穩定，可長期保存。最大吸收光波長為 570nm，最大發射光波長為595～600nm，呈現橘紅色熒光。
四甲基異硫氰酸羅丹明
(tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC) TRITC為羅丹明的衍生物，呈紫紅色粉末，較穩定。最大吸收光波長為 550nm，最大發射光波長為620nm，呈現橙紅色熒光，與FITC的翠綠色熒光對比鮮明，可配合用于雙重標記或對比染色。因其熒光淬滅慢，也可用于單獨標記染色。
酶作用后產生熒光的物質
某些化合物本身無熒光效應，一旦經酶作用便形成具有強熒光的物質。例如，4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發出熒光，激發光波長為360nm，發射光波長為450nm。其他如堿性磷酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對羥基苯乙酸等。 5．鑭系螯合物 某些3價稀土鑭系元素如銪 (Eu3+)、鋱 (Tb3+) 等的螯合物可發射特征性的熒光，而且激發光波長范圍寬、發射光波長范圍窄、熒光衰變時間長，最適合于時間分辨熒光免疫測定。
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