臨床生物化學/固定時間法（取樣法）

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臨床生物化學

血清酶定量的檢測技術
- 測定酶活性濃度的兩大類方法
  - 固定時間法（取樣法）
  - 連續監測法與反應進程的分析
  - 連續監測法測酶活性濃度
  - 酶活性的濃度單位
  - 連續監測法中的干擾因素及其控制

前面已經提到，早期臨床實驗室測酶活性時常使用比色法，先讓酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，然后停止酶反應，加入試劑進行化學反應呈色測出底物和產物的變化。由于比色法靈敏度較低，或由于手工操作不易控制好，常定在30分鐘左右。歷史上這類方法常被命名為“終點法”、“二點法”、“固定時間法”和“取樣法”。大多數文獻使用“固定時間法”。此命名指出了用這類方法測酶活性濃度，必須保證酶和底物在所選定的溫度下作用時間要很精確，否則將引起較大誤差。但“取樣法”的命名更具有特征性。因它指出此類方法和下面將提到的另一類連續監測法相比較，最基本一點的是此類方法停止反應后才測底物或物的變化。很難進行連續監測，而另一類方法則不需停止酶反應，就可測定反應物的變化，很容易觀察到反應的整個過程。后一類方法開始于50年代，Warburg首先用分光光度計。在340nm處直接監測到反應物NADH的動態變化過程。由于不停止酶反應，不需添加其它呈色試劑。測定方法簡單，結果準確，逐步取代了“取樣法”成為目前測酶活性的主要方法。

由于經歷了一個發展過程，命名比較混亂而且大部分不甚確切，IFCC建議命名為“連續監測法”，不用目前廣為流行的“動態法”術語。其原因是目前測酶活性濃度方法都是基于化學反應。圖17-6是一個典型的化學反應過程。

動態和平衡概念的示意圖

圖17-6　動態和平衡概念的示意圖

可以看出整個反應過程，可以大致分為二個時期。一開始為動態期，化學反應按一定速度進行，反應物濃度隨時間而變化，且變化程度不斷變小，到一定時間。化學反應或者達到平衡，或者反應達到終點，此時反應速度為零，反應物濃度不變。最近IFCC文件按所用方法所測定的反應是在達到平衡前還是平衡后。分別命名為動態法或平衡法。一般文獻往往將后一類方法稱為終點法。